सेल्युलोज एसीटेट मेम्ब्रेन इलेक्ट्रोफोरेसीस वापरण्यासाठी आम्ही गेल्या आठवड्यात अनेक विचार सामायिक केले आणि आम्ही आज तुमच्या संदर्भासाठी हा विषय येथे समाप्त करू.
ची निवड बफर एकाग्रता
सेल्युलोज एसीटेट मेम्ब्रेन इलेक्ट्रोफोरेसीसमध्ये वापरलेली बफर एकाग्रता सामान्यतः पेपर इलेक्ट्रोफोरेसीसमध्ये वापरल्या जाणाऱ्या कमी असते. सामान्यतः वापरलेला pH 8.6Bआर्बिटल बफर सामान्यत: 0.05 mol/L ते 0.09 mol/L च्या श्रेणीमध्ये निवडले जाते. एकाग्रता निवडताना, एक प्राथमिक निर्धार केला जातो. उदाहरणार्थ, इलेक्ट्रोफोरेसीस चेंबरमधील इलेक्ट्रोड्समधील झिल्लीच्या पट्टीची लांबी 8-10cm असल्यास, पडद्याच्या लांबीच्या प्रति सेंटीमीटर 25V चा व्होल्टेज आवश्यक आहे आणि वर्तमान तीव्रता पडद्याच्या रुंदीच्या सेंटीमीटर प्रति सेंटीमीटर 0.4-0.5 mA असावी. जर इलेक्ट्रोफोरेसीस दरम्यान ही मूल्ये प्राप्त झाली नाहीत किंवा ओलांडली गेली नाहीत, तर बफर एकाग्रता वाढविली पाहिजे किंवा पातळ केली पाहिजे.
अत्याधिक कमी बफर एकाग्रतेमुळे बँडची जलद हालचाल होईल आणि बँड रुंदीमध्ये वाढ होईल. दुसरीकडे, एक अत्याधिक उच्च बफर एकाग्रता बँड स्थलांतरण मंद करेल, ज्यामुळे विशिष्ट विभक्त बँड वेगळे करणे कठीण होईल.
हे लक्षात घेतले पाहिजे की सेल्युलोज एसीटेट झिल्ली इलेक्ट्रोफोरेसीसमध्ये, विद्युत् प्रवाहाचा एक महत्त्वपूर्ण भाग नमुन्याद्वारे आयोजित केला जातो, ज्यामुळे मोठ्या प्रमाणात उष्णता निर्माण होते. काहीवेळा, निवडलेली बफर एकाग्रता योग्य मानली जाऊ शकते. तथापि, वाढलेल्या पर्यावरणीय तापमानाच्या परिस्थितीत किंवा उच्च व्होल्टेज वापरताना, उष्णतेमुळे पाण्याचे बाष्पीभवन तीव्र होऊ शकते, परिणामी बफर एकाग्रता खूप जास्त होऊ शकते आणि पडदा कोरडा देखील होऊ शकतो.
नमुना खंड
सेल्युलोज एसीटेट झिल्ली इलेक्ट्रोफोरेसीसमध्ये, नमुन्याचे प्रमाण विविध घटकांद्वारे निर्धारित केले जाते, ज्यामध्ये इलेक्ट्रोफोरेसीस स्थिती, नमुन्याचे स्वतःचे गुणधर्म, डाग पडण्याच्या पद्धती आणि शोध तंत्र यांचा समावेश आहे. एक सामान्य तत्त्व म्हणून, शोध पद्धत जितकी अधिक संवेदनशील असेल तितकी नमुन्याची मात्रा लहान असू शकते, जे वेगळे करण्यासाठी फायदेशीर आहे. नमुन्याचे प्रमाण जास्त असल्यास, इलेक्ट्रोफोरेटिक पृथक्करण पद्धती स्पष्ट नसू शकतात आणि डाग पडणे देखील वेळखाऊ असू शकते. तथापि, इल्यूशन कलरमेट्रिक डिटेक्शन पद्धती वापरून विभक्त स्टेन्ड बँड्सचे परिमाणात्मक विश्लेषण करताना, नमुना व्हॉल्यूम खूप लहान नसावा, कारण यामुळे काही घटकांसाठी कमी शोषक मूल्ये येऊ शकतात, ज्यामुळे त्यांच्या सामग्रीची गणना करण्यात जास्त त्रुटी येऊ शकतात. अशा परिस्थितीत, नमुन्याचे प्रमाण योग्यरित्या वाढवले पाहिजे.
सामान्यतः, नमुना ऍप्लिकेशन लाइनच्या प्रत्येक सेंटीमीटरवर जोडलेले नमुन्याचे प्रमाण 0.1 ते 5 μL पर्यंत असते, जे 5 ते 1000 μg च्या नमुन्याच्या प्रमाणात असते. उदाहरणार्थ, नियमित सीरम प्रोटीन इलेक्ट्रोफोरेसीस विश्लेषणामध्ये, ऍप्लिकेशन लाइनच्या प्रत्येक सेंटीमीटरवर जोडलेले नमुना प्रमाण सामान्यतः 1 μL पेक्षा जास्त नसते, 60 ते 80 μg प्रथिनांच्या समतुल्य असते. तथापि, समान इलेक्ट्रोफोरेसीस पद्धतीचा वापर करून लिपोप्रोटीन किंवा ग्लायकोप्रोटीनचे विश्लेषण करताना, नमुन्याचे प्रमाण अनुरूपपणे वाढवणे आवश्यक आहे.
शेवटी, प्राथमिक प्रयोगांच्या मालिकेद्वारे विशिष्ट परिस्थितींवर आधारित सर्वात योग्य नमुना खंड निवडला जावा.
स्टेनिंग सोल्यूशनची निवड
सेल्युलोज एसीटेट झिल्ली इलेक्ट्रोफोरेसीसमधील विभक्त पट्ट्या विशेषत: शोधण्यापूर्वी डागलेल्या असतात. वेगवेगळ्या नमुन्याच्या घटकांना वेगवेगळ्या डागांच्या पद्धती आवश्यक असतात आणि सेल्युलोज एसीटेट झिल्ली इलेक्ट्रोफोरेसीससाठी योग्य असलेल्या डागांच्या पद्धती फिल्टर पेपरला पूर्णपणे लागू नसतात.
स्टेनिंग सोल्यूशन निवडण्यासाठी तीन प्रमुख तत्त्वे आहेतसेल्युलोज एसीटेट पडदा. सर्वप्रथम,अल्कोहोल-विरघळणाऱ्या रंगांपेक्षा पाण्यात विरघळणाऱ्या रंगांना प्राधान्य दिले पाहिजे जेणेकरून पडदा आकुंचन आणि नंतरच्या डागांच्या द्रावणामुळे होणारे विकृती टाळण्यासाठी. डाग पडल्यानंतर, पडदा पाण्याने स्वच्छ धुवा आणि डाग पडण्याचा कालावधी कमी करणे महत्वाचे आहे. अन्यथा, पडदा कुरळे होऊ शकतो किंवा संकुचित होऊ शकतो, ज्यामुळे नंतरच्या तपासणीवर परिणाम होईल.
दुसरे म्हणजे, नमुन्यासाठी मजबूत स्टेनिग आत्मीयतेसह रंग निवडणे श्रेयस्कर आहे. सीरम प्रोटीन्सच्या सेल्युलोज एसीटेट मेम्ब्रेन इलेक्ट्रोफोरेसीसमध्ये, अमीनो ब्लॅक 10B सामान्यतः वापरले जाते कारण विविध सीरम प्रथिने घटक आणि त्याच्या स्थिरतेसाठी मजबूत स्टेनिंग आत्मीयता आहे.
तिसरे म्हणजे, विश्वसनीय दर्जाचे रंग निवडले पाहिजेत. काही रंगांमध्ये, समान नाव असूनही, अशुद्धता असू शकतात ज्यामुळे डाग पडल्यानंतर विशेषतः गडद पार्श्वभूमी तयार होते. हे मूळतः चांगल्या प्रकारे विभक्त केलेले बँड देखील अस्पष्ट करू शकते, ज्यामुळे त्यांना वेगळे करणे कठीण होते.
शेवटी, स्टेनिंग सोल्यूशनच्या एकाग्रतेची निवड महत्वाची आहे. सैद्धांतिकदृष्ट्या, असे दिसते की उच्च स्टेनिग सोल्यूशन एकाग्रतेमुळे नमुना घटकांचे अधिक कसून डाग पडतील आणि चांगले डाग पडतील. मात्र, असे नाही. नमुना घटक आणि डाई यांच्यातील बंधनकारक आत्मीयता एक विशिष्ट मर्यादा आहे, जी स्टेनिंग सोल्यूशनच्या एकाग्रतेच्या वाढीसह वाढत नाही. याउलट, जास्त प्रमाणात स्टेनिंग सोल्यूशन एकाग्रता केवळ डाई वाया घालवत नाही तर स्पष्ट पार्श्वभूमी प्राप्त करणे देखील कठीण करते. शिवाय, जेव्हा रंगाची तीव्रता एका विशिष्ट कमाल मूल्यापर्यंत पोहोचते, तेव्हा डाईचे शोषक वक्र रेखीय संबंधांचे पालन करत नाही, विशेषत: परिमाणवाचक मापांमध्ये. सेल्युलोज एसीटेट झिल्ली इलेक्ट्रोफोरेसीसमध्ये, स्टेनिंग सोल्यूशनची एकाग्रता कागदाच्या इलेक्ट्रोफोरेसीसमध्ये वापरल्या जाणाऱ्या पेक्षा कमी असते.
बीजिंग Liuyi बायोटेक्नॉलॉजी बद्दल जाणून घेण्यासाठी तपशील's सेल्युलोज एसीटेट पडदाइलेक्ट्रोफोरेसीस टाकी आणि त्याचे इलेक्ट्रोफोरेसीस ऍप्लिकेशन, कृपया येथे भेट द्या:
lसेल्युलोज एसीटेट मेम्ब्रेनद्वारे सीरम प्रोटीन वेगळे करण्याचा प्रयोग
lसेल्युलोज एसीटेट झिल्ली इलेक्ट्रोफोरेसीस
lसेल्युलोज एसीटेट मेम्ब्रेन इलेक्ट्रोफोरेसीस (१) वापरताना अनेक बाबी लक्षात ठेवल्या पाहिजेत.
आमच्या उत्पादनांसाठी तुमच्याकडे कोणतीही खरेदी योजना असल्यास, कृपया आमच्याशी संपर्क साधण्यास अजिबात संकोच करू नका. तुम्ही आम्हाला ईमेलवर संदेश पाठवू शकता[ईमेल संरक्षित]किंवा[ईमेल संरक्षित], किंवा कृपया आम्हाला +86 15810650221 वर कॉल करा किंवा Whatsapp +86 15810650221, किंवा Wechat: 15810650221 जोडा.
संदर्भ:इलेक्ट्रोफोरेसीस (दुसरी आवृत्ती) श्री. ली
पोस्ट वेळ: जून-06-2023