हिमोग्लोबिन इलेक्ट्रोफोरेसीस प्रयोग

प्रयोगाचे तत्व

हिमोग्लोबिन इलेक्ट्रोफोरेसीसचा उद्देश विविध सामान्य आणि असामान्य हिमोग्लोबिन शोधणे आणि पुष्टी करणे.

वेगवेगळ्या प्रकारच्या हिमोग्लोबिनच्या वेगवेगळ्या चार्जेस आणि आयसोइलेक्ट्रिक बिंदूंमुळे, विशिष्ट pH बफर सोल्युशनमध्ये, जेव्हा हिमोग्लोबिनचा समविद्युत बिंदू बफर सोल्यूशनच्या pH पेक्षा कमी असतो, तेव्हा हिमोग्लोबिन नकारात्मक चार्ज घेते आणि इलेक्ट्रोफोरेसीस दरम्यान एनोडकडे स्थलांतरित होते. याउलट, सकारात्मक चार्ज असलेले हिमोग्लोबिन कॅथोडकडे सरकते.

विशिष्ट व्होल्टेज अंतर्गत आणि विशिष्ट इलेक्ट्रोफोरेसीस वेळेनंतर, भिन्न आकार आणि आण्विक वजन असलेले हिमोग्लोबिन भिन्न स्थलांतर दिशा आणि वेग प्रदर्शित करतात. हे वेगळे झोन वेगळे करण्यास अनुमती देते आणि विविध हिमोग्लोबिनचे प्रमाण निश्चित करण्यासाठी या झोनवर त्यानंतरचे कलरमेट्रिक किंवा इलेक्ट्रोफोरेटिक स्कॅनिंग विश्लेषण केले जाऊ शकते. सर्वात सामान्यतः वापरली जाणारी पद्धत म्हणजे pH 8.6 सेल्युलोज एसीटेट झिल्ली इलेक्ट्रोफोरेसीस.

सायटोप्लाझममध्ये, ग्लायकोजेन किंवा पॉलिसेकेराइड पदार्थांमध्ये (जसे की म्यूकोपॉलिसॅकेराइड्स, म्यूकोप्रोटीन्स, ग्लायकोप्रोटीन्स, ग्लायकोलिपिड्स इ.) मध्ये उपस्थित इथिलीन ग्लायकॉल गट (CHOH-CHOH) नियतकालिक ऍसिडद्वारे ऑक्सिडाइझ केले जातात आणि अल्डीहाइड-सीएचओएचओ गटांमध्ये (सीएचओएचओ) रूपांतरित केले जातात. हे अल्डीहाइड गट रंगहीन जांभळ्या-लाल शिफ अभिकर्मकासह एकत्र होतात, जांभळा-लाल रंग तयार करतात जे सेलमध्ये पॉलीसेकेराइड्स असतात तिथे जमा करतात. ही प्रतिक्रिया नियतकालिक ऍसिड-शिफ (पीएएस) स्टेनिंग म्हणून ओळखली जाते, ज्याला पूर्वी ग्लायकोजेन स्टेनिंग म्हणून संबोधले जाते.

प्रयोग पद्धत

साहित्य:सेल्युलोज एसीटेटमेमब्रेन, इलेक्ट्रोफोरेसीस उपकरण(DYCP-38C आणि वीज पुरवठा DYY-6C), सुपीरियर नमुना लोडिंग टूल(पिपेट), स्पेक्ट्रोफोटोमीटर, कलरमेट्रिक क्युवेट्स, बफर

बफर:

(1) pH 8.6 TEB बफर: वजन 10.29 g Tris, 0.6 g EDTA, 3.2 g बोरिक ऍसिड, आणि 1000 ml मध्ये डिस्टिल्ड वॉटर घाला.

(2) बोरेट बफर: वजन 6.87 ग्रॅम बोरॅक्स आणि 5.56 ग्रॅम बोरिक ऍसिड, आणि डिस्टिल्ड वॉटर 1000 मिली.

प्रक्रिया:

Pहिमोग्लोबिन सोल्यूशनची दुरुस्ती

हेपरिन किंवा सोडियम सायट्रेट असलेले 3 मिली रक्त अँटीकोआगुलंट म्हणून घ्या. 2000 rpm वर 10 मिनिटे अपकेंद्रित करा आणि प्लाझ्मा टाकून द्या. लाल रक्तपेशी तीन वेळा फिजियोलॉजिकल सलाईनने धुवा (750 rpm, प्रत्येक वेळी 5 मिनिटे सेंट्रीफ्यूगेशन). 10 मिनिटांसाठी 2200 rpm वर अपकेंद्रित करा आणि सुपरनॅटंट टाकून द्या. समान प्रमाणात डिस्टिल्ड वॉटर घाला, नंतर कार्बन टेट्राक्लोराईडच्या 0.5 पट घाला. 5 मिनिटे जोमाने शेक करा, आणि नंतर वापरण्यासाठी वरच्या Hb द्रावण गोळा करण्यासाठी 10 मिनिटे 2200 rpm वर सेंट्रीफ्यूज करा.

पडदा भिजवणे

सेल्युलोज एसीटेट झिल्ली 3 सेमी × 8 सेमी मोजण्याच्या पट्ट्यामध्ये कापून टाका. पूर्णपणे संतृप्त होईपर्यंत त्यांना pH 8.6 TEB बफरमध्ये भिजवा, नंतर फिल्टर पेपरने काढून टाका आणि कोरडे करा.

स्पॉटिंग

10 μl हिमोग्लोबिनचे द्रावण सेल्युलोज एसीटेट झिल्लीवर (उग्र बाजू), काठापासून सुमारे 1.5 सेमी अंतरावर उभ्या शोधण्यासाठी पिपेट वापरा.

इलेक्ट्रोफोरेसीस

इलेक्ट्रोफोरेसीस चेंबरमध्ये बोरेट बफर द्रावण घाला. सेल्युलोज एसीटेट झिल्ली चेंबरच्या कॅथोड टोकाला स्पॉटेड बाजूसह ठेवा. 200 V वर 30 मिनिटे चालवा.

एल्युशन

HbA आणि HbA2 झोन कापून टाका, त्यांना वेगळ्या टेस्ट ट्यूबमध्ये ठेवा आणि अनुक्रमे 15 मिली आणि 3 मिली डिस्टिल्ड वॉटर घाला. हिमोग्लोबिन पूर्णपणे कमी करण्यासाठी हलक्या हाताने हलवा, नंतर मिसळा.

रंगमिती

इल्युशन सोल्युशनसाठी डिस्टिल्ड वॉटर वापरून शोषकता शून्य करा आणि शोषकता 415 एनएम मोजा.

गणना

HbA2(%) = HbA2 ट्यूबचे शोषण / (HbA ट्यूबचे शोषण × 5 + HbA2 ट्यूबचे शोषण) × 100%

प्रायोगिक परिणाम गणना

pH 8.6 TEB बफर सेल्युलोज एसीटेट इलेक्ट्रोफोरेसीससाठी संदर्भ श्रेणी: HbA > 95%, HbA2 1%-3.1%

नोट्स

इलेक्ट्रोफोरेसीसची वेळ फार मोठी नसावी. इलेक्ट्रोफोरेसीस दरम्यान सेल्युलोज एसीटेट झिल्ली कोरडे होऊ नये. जेव्हा HbA आणि HbA2 स्पष्टपणे वेगळे केले जातात तेव्हा इलेक्ट्रोफोरेसीस थांबवा. दीर्घकाळापर्यंत इलेक्ट्रोफोरेसीसमुळे बँडचा प्रसार आणि अस्पष्टता होऊ शकते.

जास्त नमुना वापरणे टाळा. अत्यधिक हिमोग्लोबिन द्रव बँड डिटेचमेंट किंवा अपुरे डाग होऊ शकते, परिणामी खोटे उच्च HbA पातळी होऊ शकते.

प्रथिनांसह सेल्युलोज एसीटेट झिल्लीचे दूषित होण्यास प्रतिबंध करा.

वर्तमान खूप जास्त नसावे; अन्यथा, हिमोग्लोबिन बँड वेगळे होऊ शकत नाहीत.

नेहमी सामान्य व्यक्तींचे नमुने आणि आवश्यक ज्ञात असामान्य हिमोग्लोबिन्स नियंत्रण म्हणून समाविष्ट करा.

बीजिंग लियुई बायोटेक्नॉलॉजी हेमोग्लोबिन इलेक्ट्रोफोरेसीससाठी व्यावसायिक इलेक्ट्रोफोरेसीस टँक तयार करते जे मॉडेल आहेDYCP-38Cसेल्युलोज एसीटेट झिल्ली इलेक्ट्रोफोरेसीस टाकी, आणि सेल्युलोज एसीटेट झिल्ली इलेक्ट्रोफोरेसीस टाकीसाठी इलेक्ट्रोफोरेसीस वीज पुरवठ्याचे दोन मॉडेल उपलब्ध आहेतDYY-2CआणिDYY-6Cवीज पुरवठा.

दरम्यान, बीजिंग लियुई बायोटेक्नॉलॉजी ग्राहकांसाठी सेल्युलोज एसीटेट झिल्ली प्रदान करते आणि सेल्युलोज एसीटेट झिल्लीचा आकार सानुकूलित केला जाऊ शकतो. आम्हाला नमुने आणि अधिक माहितीसाठी विचारण्यासाठी आपले स्वागत आहे.

बीजिंग Liuyi ब्रँडचा चीनमध्ये 50 वर्षांपेक्षा जास्त इतिहास आहे आणि कंपनी जगभरात स्थिर आणि उच्च दर्जाची उत्पादने देऊ शकते. विकासाच्या वर्षांच्या माध्यमातून, ते आपल्या पसंतीस पात्र आहे!

आम्ही आता भागीदार शोधत आहोत, OEM इलेक्ट्रोफोरेसीस टाकी आणि वितरक दोघांचेही स्वागत आहे.

आमच्या उत्पादनांसाठी तुमच्याकडे कोणतीही खरेदी योजना असल्यास, कृपया आमच्याशी संपर्क साधण्यास अजिबात संकोच करू नका. तुम्ही आम्हाला ईमेलवर संदेश पाठवू शकता[ईमेल संरक्षित]किंवा[ईमेल संरक्षित], किंवा कृपया आम्हाला +86 15810650221 वर कॉल करा किंवा Whatsapp +86 15810650221, किंवा Wechat: 15810650221 जोडा